Ceanglais Tástálacha Feisteáin ELISA

Déan codarsnacht mhaith sa tástáil fhoirmiúil, ba cheart na coinníollacha tástála rialaithe dearfacha agus diúltacha a ghlacadh, agus ba cheart na samplaí atá le tástáil a dhéanamh i dhá chóip chun cruinneas na dtorthaí tástála a chinntiú.

Uaireanta tá an cúlra níos airde, rud a léiríonn imoibriú nonspecific, is féidir é a dhúnadh le serum caorach, serum coinín nó BSA.

Roghnú coinníollacha turgnamhacha

In ELISA, tá sé tábhachtach coinníollacha turgnamhacha éagsúla a roghnú, lena n-áirítear: (1) Rogha iompróirí pas soladacha: Is féidir go leor substaintí a úsáid mar iompróirí pas soladacha, amhail PVC, polaistiréin, polyacrylamide agus ceallalóis. Is féidir é a bheith i bhfoirm pláta cuasach, feadán tástála, coirnín, etc. Faoi láthair, úsáidtear go coitianta plátaí cuasach polaistiréin 40-tobar a bheith ann.

Is cuma cén cineál iompróra, sular féidir úsáid a scagadh: is é an méid céanna pacáiste antigen, faoi na coinníollacha turgnamhacha céanna chun freagairt, féachaint an bhfuil aonchineálacht ag a imoibriú rindreála dath, de réir a bhfuil feidhmíocht asaithe maith. (2) Roghnú antashubstainte (nó antaigin): antashubstaint (nó antaigin) a adsorbaítear ar dhromchla an iompróra céim soladach, is é an déine ceanglais níos fearr, go ginearálta éilíonn asaithe PH idir 9.0 agus 9.6. Tá tionchar áirithe ag teocht asaithe, am agus méid próitéine freisin, go ginearálta níos mó ná 4 céim C 18 go 24 uair an chloig. Ní mór an tiúchan is fearr de phacáistí próitéine a thoirtmheascadh: tar éis iad a bheith pacáistithe le tiúchan próitéine éagsúla (0.1, 1.0 agus 10 ?g/ml, etc.), breathnaítear luachanna OD na n-eiseamal deimhneacha nuair a bhíonn coinníollacha tástála eile mar an gcéanna. Roghnaigh an tiúchan leis an luach OD is mó agus an méid próitéine is ísle.

I gcás an chuid is mó de phróitéiní, is gnách go mbíonn sé 1 go 10 ?g/ml. (3) Roghnú na heinsíme-tiúchan oibre antasubstainte lipéadaithe: ar dtús, éifeacht tosaigh an toirtmheasctha ag baint úsáide as an modh díreach ELISA (féach an chuid antasubstainte lipéadaithe einsím).

Ansin socraigh coinníollacha eile nó tóg an "modh eagar cearnach" (pacáiste edgy, tagairt don sampla atá le scrúdú, agus caoluithe difriúla iad antasubstaintí lipéadaithe einsímeacha) sa chóras turgnamhach foirmiúil, toirtmheascadh cruinn ar a thiúchan oibre. (4) Rogha bhun na heinsíme agus an deontóra hidrigine: tá rogha an deontóra hidrigine saor, sábháilte, le imoibriú rindreála dath soiléir, agus tá sé féin gan dath. D'fhéadfadh éifeachtaí carcanaigineacha a bheith ag roinnt deontóirí hidrigine (m.sh. OPD, etc.), ba cheart cúram a ghlacadh chun cosaint a thabhairt. Ba cheart go n-úsáidfeadh daoine coinníollach deontóirí hidrigine neamh-charcanaigineach, íogaireacht ard, mar TMB agus ABTS is deontóirí hidrigine níos sásúla faoi láthair. Tar éis tréimhse gníomhaíochta, ba chóir aigéid láidre nó alcailí a chur leis chun an t-imoibriú a stopadh. De ghnáth is é an t-am gníomhaíochta tsubstráit, go 10-30 nóiméad is cuí. Ní mór an sreabhach úsáide tsubstráit a ullmhú go húr, go háirithe má chuirtear H2O2 leis roimh úsáid.